ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การพัฒนาการตรวจวินิจฉัยเชื้อ Pythium insidiosum โดยอาศัยเทคนิคทางชีววิทยาระดับโมเลกุล

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การพัฒนาการตรวจวินิจฉัยเชื้อ Pythium insidiosum โดยอาศัยเทคนิคทางชีววิทยาระดับโมเลกุล
นักวิจัย : จุฬารัตน์ ปริยชาติกุล
คำค้น : diagnostic kit , P.insidiosum , seminested PCR , seminested polymerase chain reaction , ชุดตรวจสำเร็จรูป
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2550
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=RSA4780009 , http://research.trf.or.th/node/1657
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

เชื้อ Pythium insidiosum เป็นเชื้อที่ทำให้เกิดโรค Pythiosisในสัตว์และคน โรคนี้พบไม่บ่อยแต่มีความรุนแรง มีอัตราการพิการและเสียชีวิตสูง วิธีการตรวจวินิจฉัยเชื้อ P.insidiosum จึงมีความจำเป็นและมีความสำคัญ การศึกษาครั้งนี้เป็นการใช้เทคนิค seminested polymerase chain reaction ทำให้การตรวจวินิจฉัยมีความจำเพาะและความรวดเร็วมากขึ้น การออกเเบบไพร์เมอร์สำหรับจีน 18S rRNA ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มีการใช้ข้อมูลจาก GenBank ทั้งหมด 98 accesses ซึ่งประกอบไปด้วยข้อมูลของ Pythium spp., เชื้อราอื่นๆ และคน ทำการวิเคราะห์ หาบริเวณที่เป็น Conserve และ Variable จากการวิเคราะห์ได้ไพร์เมอร์ CPL6 และ PSL1 ซึ่งเป็นไพร์เมอร์ที่มีความจำเพาะกับเชื้อ P.insidiosum ได้นำไพร์เมอร์ทั้งสองนี้นำไปใช้ร่วมกับไพร์เมอร์ CPR8 จะได้ product ขนาด 512 และ152 bp ตามลำดับการพัฒนาเทคนิค seminested PCR มีการหาสภาวะที่เหมาะสมโดยมีการปรับ ความเข้มข้นของไพร์เมอร์ CPL6, MgCl2, dNTPs, Taq DNA polymerase และจำนวนรอบ โดยมีความไวของการทดสอบเมื่อทดสอบกับ P.insidiosum สายพันธุ์ MCC2 เท่ากับ 1 pg ความจำเพาะของการทดสอบเมื่อทดสอบกับเชื้อ P.insidiosum ที่แยกได้จากสิ่งส่งตรวจจำนวน 34 สายพันธุ์และเชื้อ Pythium spp. จำนวน 5 สายพันธุ์ พบ product ขนาด 512 และ152 bp ส่วนเชื้อราอื่นๆ 23 สายพันธุ์, แบคทีเรีย 10 สายพันธุ์ และเลือดจากคนปกติ จำนวน 1 รายไม่พบ product ขนาด 512 และ152 bp และมีการใช้เทคนิค seminested PCR ในการตรวจชิ้นเนื้อที่มีการติดเชื้อ P.insidiosum จำนวน 4 ตัวอย่าง, ชิ้นเนื้อที่มีการติดเชื้อ Candida spp. จำนวน 2 ตัวอย่างและในสิ่งส่งตรวจจำลอง 3 ตัวอย่างที่ใส่เชื้อ P.insidiosum และ A.niger ได้ product จำเพาะจากชิ้นเนื้อที่ติดเชื้อ P.insidiosum และสิ่งส่งตรวจจำลองที่ใส่เชื้อ P.insidiosum เข้าไปเท่านั้น นอกจากนี้ยังมีการพัฒนาน้ำยาที่ใช้ในการตรวจวินิจฉัยเชื้อ P.insidiosum อยู่ในรูปของชุดตรวจสำเร็จรูปเพื่อสะดวกในการใช้งานสำหรับสิ่งส่งตรวจต่อไป Pythium insidiosum is a rare pathogen that causes pythiosis in animals and humans with high morbidity and mortality. The accurate and rapid method to diagnose P. insidiosum is important and necessary. The purpose of this study was to develop a seminested polymerase chain reaction for the identification of P. insidiosum targeted to 18S rRNA gene . Primers were designed from 98 nucleotide sequences of Pythium species, other fungi and human. The primer CPL6 and PSL1 was specific for P. insidiosum . The primer CPR8 were paired with CPL6 and PSL1, which resulted in PCR products size of 512 and 152 bp. The development of a seminested PCR usually requires strategic planning and multiple attempts to optimize reaction conditions (concentration of the primer CPL6, amplification cycle, concentration of MgCl2, dNTPs, and Taq DNA polymerase). Sensitivity of the assay was 1 pg that tested with DNA of P. insidiosum strain MCC2. Specificity of the assay was tested with DNA extracted from cultures of the 34 isolates of P. insidiosum , 5 Pythium spp., 23 species of fungi, 10 species of bacteria and healthy normal blood. Seminested PCR produced specific amplicon for each of the P. insidiosum and 5 Pythium spp., but did not produce amplicons with fungal species, bacterial species and healthy normal blood. Four biopsy tissues of pythiosis , two biopsy tissues of candidosis and three simulated samples were tested and revealed PCR product only in biopsy tissues of pythiosis patients and simulated samples that spiked with P. insidiosum. The diagnostic kit for P. insidiosum was also developed to use with clinical samples.

บรรณานุกรม :
จุฬารัตน์ ปริยชาติกุล . (2550). การพัฒนาการตรวจวินิจฉัยเชื้อ Pythium insidiosum โดยอาศัยเทคนิคทางชีววิทยาระดับโมเลกุล.
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
จุฬารัตน์ ปริยชาติกุล . 2550. "การพัฒนาการตรวจวินิจฉัยเชื้อ Pythium insidiosum โดยอาศัยเทคนิคทางชีววิทยาระดับโมเลกุล".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
จุฬารัตน์ ปริยชาติกุล . "การพัฒนาการตรวจวินิจฉัยเชื้อ Pythium insidiosum โดยอาศัยเทคนิคทางชีววิทยาระดับโมเลกุล."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2550. Print.
จุฬารัตน์ ปริยชาติกุล . การพัฒนาการตรวจวินิจฉัยเชื้อ Pythium insidiosum โดยอาศัยเทคนิคทางชีววิทยาระดับโมเลกุล. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2550.