ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การศึกษาการออกฤทธิ์ที่จำเพาะเจาะจงของโปรตีนสารพิษฆ่าลูกน้ำยุงจากแบคทีเรีย Bacillus thuringiensis

หน่วยงาน สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การศึกษาการออกฤทธิ์ที่จำเพาะเจาะจงของโปรตีนสารพิษฆ่าลูกน้ำยุงจากแบคทีเรีย Bacillus thuringiensis
นักวิจัย : ชนันท์ อังศุธนสมบัติ , Chanun Angsuthanasombat
คำค้น : Bacillus thuringiensis , Biochemistry , Biological sciences , Biology and biochemistry , BT-B-06-XG-14-4505 , Larvae , Mosquitoes , ลูกน้ำยุง , ศูนย์พันธุวิศวกรรมและเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ , สาขาเกษตรศาสตร์และชีววิทยา
หน่วยงาน : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2549
อ้างอิง : http://www.nstda.or.th/thairesearch/node/2281
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

โครงสร้างทาง X-ray ของโปรตีน Cry แต่ละชนิดจากแบคทีเรีย Bacillus thuringiensis แสดงลักษณะ คล้ายกันโดยประกอบด้วย 3 ส่วน (domain) โดยที่ Domain II ซึ่งมีลักษณะเป็น three ?-sheet prism และมี ส่วนที่ยื่นเป็น Loop อย่างเด่นชัดนั้นได้ถูกแสดงว่าเป็นส่วนที่ทําหน้าที่จับกับ Receptor แต่หน้าที่ของ Domain III ซึ่งมีลักษณะเป็น ?-sheet sandwich นั้น ยังไม่มีความชัดเจน ในรายงานนี้ เราได้พัฒนาวิธีการ ที่เรียกว่า Microscale Ex Vivo Cytotoxicity Assay เพื่อทดสอบความเป็นพิษของโปรตีนฆ่าลูกน้ำยุงชนิด Cry4Ba และโปรตีนกลายพันธุ์ โดยตรวจวัดการออกฤทธิ์ต่อชิ้นกระเพาะที่แยกจากลูกน้ํายุงลาย Stegomyia (Aedes) aegypti (Barusrux et al, J Biochem Mol Biol, 2003) และได้สร้างโครงสร้างจําลอง 3 มิติ ของ โปรตีน Cry4Aa และ Cry4Ba เพื่อใช้ศึกษาเชิงโครงสร้างก่อนที่จะมี โครงสร้างทาง X-ray ของโปรตีนทั้ ง 2 ให้ใช้ (Angsuthanasombat et al, J Biochem Mol Biol, 2004) เมื่อศึกษาโดยใช้วิธีการเปลี่ยนแปลงยีน เฉพาะที่ (Directed Mutagenesis) ในการศึกษาบริเวณ Loop ของส่วนที่ใช้จับกับ Receptor (Domain II) ของ Cry4Ba พบว่า กรดอะมิโน Pro389 ใน Loop ?6-?7 Ser410 และ Glu417 ใน Loop ?8-?9 Tyr455 and Asn456 ใน Loop ?10-?11 นั้นมีความสําคัญต่อความเป็นพิษฆ่าลูกน้ํายุง (Tuntitipawan et al, FEMS Microbiol, 2005) เมื่อศึกษาต่อ พบว่า ลักษณะความเป็น Aromaticity ของ Tyr322 and Phe364 ซึ่งอยู่ที่ บริเวณยอดของ Loop ?2-?3 และ Loop ?4-?5 นั้นมีความสําคัญต่อการออกฤทธิ์ฆ่าลูกน้ํายุง โดยน?าจะ เกี่ยวข้องกับการจับกับ Receptor ของโปรตีน Cry4Ba และยังพบว่า พันธะไฮโดรเยน (H-bonding) ระหว่าง Thr328 และ Thr369 นั้น มีส่วนทําให้โครงสร้างของ Loop ?2-?3 และ Loop ?4-?5 มีเสถียรภาพ (Barusrux et al, Manuscript in Preparation) นอกจากนี้ ยังสามารถทําให้มี สร้างเฉพาะส่วนที่เป็น Domain III ซึ่งมี ขนาด 21 กิโลดาลตัน ในเชื้อ Escherichia coli เป็นปริมาณสูงในรูปที่ละลายได้ และเมื่อใช้วิธีการ Immunohistochemical Assay พบว่า ส่วนที่สร้างได้นี้สามารถจับกับบริเวณ Apical Microvilli ของกระเพาะลูกน้ำยุง S. aegypti จึงน่าจะเกี่ยวข้องกับการจับกับ Receptor (Chayaratanasin et al, Submitted to Appl Environ Microbiol, 2006) และเมื่อศึกษาต่อเฉพาะกรดอะมิโนที่ถูกอนุรักษ์ในบริเวณ ?17 อันได้แก่ Tyr537 Arg540 Arg542 และ Tyr543 พบว่า ลักษณะความเป็นประจุ บวกของ Arg542 และ ลักษณะความเป็น Hydrophobicity ของ Try543 มีส?วนเกี่ยวข้องกับความเป็นพิษฆ่าของโปรตีน Cry4Ba (Chayaratanasin et al, Manuscript in Preparation) นอกจากนี้ ได้พัฒนาวิธีการแยกบริสุทธิ์เฉพาะส่วนที่ออกฤทธิ์ ขนาด 65 กิโลดาลตัน ของโปรตีน Cry4Aa ซึ่งจะนําไปสู่ การตกผลึกโปรตีนเพื่อโครงสร้างทาง X-ray ของโปรตีน ดังกล่าวต่อไป (Boonserm et al, Prot Expres Purif, 2004)

บรรณานุกรม :
ชนันท์ อังศุธนสมบัติ , Chanun Angsuthanasombat . (2549). การศึกษาการออกฤทธิ์ที่จำเพาะเจาะจงของโปรตีนสารพิษฆ่าลูกน้ำยุงจากแบคทีเรีย Bacillus thuringiensis.
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ.
ชนันท์ อังศุธนสมบัติ , Chanun Angsuthanasombat . 2549. "การศึกษาการออกฤทธิ์ที่จำเพาะเจาะจงของโปรตีนสารพิษฆ่าลูกน้ำยุงจากแบคทีเรีย Bacillus thuringiensis".
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ.
ชนันท์ อังศุธนสมบัติ , Chanun Angsuthanasombat . "การศึกษาการออกฤทธิ์ที่จำเพาะเจาะจงของโปรตีนสารพิษฆ่าลูกน้ำยุงจากแบคทีเรีย Bacillus thuringiensis."
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ, 2549. Print.
ชนันท์ อังศุธนสมบัติ , Chanun Angsuthanasombat . การศึกษาการออกฤทธิ์ที่จำเพาะเจาะจงของโปรตีนสารพิษฆ่าลูกน้ำยุงจากแบคทีเรีย Bacillus thuringiensis. ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ; 2549.