ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

Molecular Cloning and expression of recombinant human insulin and human serum albumin in Pichia pastoris

หน่วยงาน สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : Molecular Cloning and expression of recombinant human insulin and human serum albumin in Pichia pastoris
นักวิจัย : วิฑูรย์ ถิระโสภณ , Witoon Tirasophon
คำค้น : Biological sciences , Clinical medicine , Insulin , Medical biotechnology , Pichia pastoris , Proteins , Serum albumin , ยีสต์ , ศูนย์พันธุวิศวกรรมและเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ , สาขาวิทยาศาสตร์การแพทย์ , โคลนิง , โปรตีน
หน่วยงาน : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2549
อ้างอิง : http://www.nstda.or.th/thairesearch/node/451
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

Human serum albumin (HSA) และ human insulin (INS) เป็นตัวอย่างของโปรตีนประเภทที่ปราศจากกลุ่มน้ำตาลที่เป็นที่ต้องการสำหรับ การใช้เพื่อการรักษาโรค งานวิจัยได้ประยุกต์ใช้การแสดงออกในยีสต์ Pichia pastolis เพื่อผลิต HSA และ INS ในรูปของโปรตีนรีคอมบิแนนท์ในปริมาณสูง งานวิจัยเริ่มจากการโคลน cDNA ของ HSA จากเซลล์ HepG2 โดยวิธี RT-PCR เมื่อนำชิ้น cDNA ไปเชื่อมต่อเข้ากับพลาสมิดพาหะ pPICZ??แล้วถ่ายเข้าสู่จีโนมของ P. pastolis พบว่ายีสต์ลูกผสมดังกล่าวสามารถผลิต HSA ได้ในระดับสูงโดยสามารถวัดปริมาณ HSA ที่ยีสต์ปล่อยออกมาในอาหารเลี้ยงเซลล์ได้สูงถึง 800 มิลลิกรัมต่อลิตรหลังจากกระตุ้นด้วย methanol เป็นเวลา 5 วัน ณ อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสที่ระดับห้องทดลอง อย่างได้ก็ดีพบว่าในสภาวะดังกล่าวพบการเสื่อมสลายของ HSA ในอัตราส่วนสูงอันเนื่องมาจากการถูกย่อยสลายด้วยเอ็นไซม์โปรติเอสที่ปน เปื้อนอยู่ในอาหารเลี้ยงเซลล์ อัตราการถูกย่อยสลายนี้ลดลงอย่างชัดเจนหากทำการลดอุณหภูมิเป็น 22 องศาเซลเซียสในระหว่างการกระตุ้นด้วย methanol งานวิจัยนี้ยังได้สร้างยีนสังเคราะห์สำหรับผลิตผลิตโปรตีน preproinsulin โดยวิธี overlapped extension PCR พบว่ายีนสังเคราะห์นี้สามารถผลิต INS ได้ในระบบเซลล์ไตลิงและสามารถปล่อยออกมาในอาหารเลี้ยงเซลล์ได้เป็นปกติ ในทางกลับกันเมื่อต่อยีนสังเคราะห์นี้เข้ากับ? factor leader ในพลาสมิดพาหะ pPICZ??สำหรับการแสดงออกใน P. pastolis พบว่าแม้มีการผลิตโปรตีนจากยีนสังเคราะห์นี้แต่โปรตีนดังกล่าวไม่เข้าสู่ กระบวนย่อยด้วยโปรติเอสและปล่อย INS ออกมาในอาหารเลี้ยงเซลล์ได้ เมื่อทำการเปลี่ยนแปลงยีนสังเคราะห์นี้ในส่วนของลำดับกรดอะมิโนในส่วน ??factor leader ไปพร้อมกับการแทนที่ลำดับกรดอะมิโนในส่วนของ C chain ด้วยลำดับกรดอะมิโน Ala-Ala-Lys ก็สามารถแก้ไขปัญหาดังกล่าวได้ โดยยีสต์ลูกผสมสามารถผลิตและปล่อย INS ออกมาในอาหารเลี้ยงเซลล์ได้ในประมาณ120 มิลลิกรัมต่อลิตรในระดับห้องทดลอง

บรรณานุกรม :
วิฑูรย์ ถิระโสภณ , Witoon Tirasophon . (2549). Molecular Cloning and expression of recombinant human insulin and human serum albumin in Pichia pastoris.
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ.
วิฑูรย์ ถิระโสภณ , Witoon Tirasophon . 2549. "Molecular Cloning and expression of recombinant human insulin and human serum albumin in Pichia pastoris".
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ.
วิฑูรย์ ถิระโสภณ , Witoon Tirasophon . "Molecular Cloning and expression of recombinant human insulin and human serum albumin in Pichia pastoris."
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ, 2549. Print.
วิฑูรย์ ถิระโสภณ , Witoon Tirasophon . Molecular Cloning and expression of recombinant human insulin and human serum albumin in Pichia pastoris. ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ; 2549.