ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การคัดเลือกและการขยายยีน chitin deacetylase

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การคัดเลือกและการขยายยีน chitin deacetylase
นักวิจัย : ศรีสุรางค์ ตันติมาวานิช
คำค้น : chitin deacetylase , Rhizopus , Rhizopus oryzae
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2552
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=PDF4180023 , http://research.trf.or.th/node/568
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

Rhizopus oryzae F11 เป็นเชื้อที่สร้างเอนไซม์เพื่อ deacetylate chitin ได้ดี เมื่อเทียบกับ เชื้อรา 11 สายพันธุ์ และเชื้อแบคทีเรีย 1 สายพันธุ์ที่สร้างเอนไซม์ chitin deacetylase (CDA) ในที่ นี้ให้ชื่อเอนไซม์ CDA จากสายพันธุ์ F11 ว่า CDA-TP11 เอนไซม์ CDA-TP11 มี pH และอุณหภูมิ ที่เหมาะสมสำหรับการทำงานที่ pH 6-8 และ 50o ซ ได้ทำการโคลนยีน cda-TP11 ด้วยวิธี RT-PCR และใช้ degenerated primers 2 คู่ นำ RT-PCR products ที่ได้ไปหาลำดับนิวคลีโอไทด์ และใช้ ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ได้ไปออกแบบ gene specific primers (GSPs) และ antisense GSPs จาก นั้นตามด้วยการนำ primers GSPs และ antisense GSPs สังเคราะห์ไปโคลนยีนด้าน 3? และ 5? ของ RT-PCR products ด้วยวิธี RACE และใช้ cDNA เป็นดีเอ็นเอแม่แบบ จากลำดับนิวคลีโอไทด์ ที่ได้ทั้งหมดพบว่ายีน cda-TP11 มี open reading frame (ORF) ที่ประกอบด้วยนิวคลีโอไทด์ จำนวน 1,341 คู่เบส และมีลำดับเบสคล้ายกับยีน cda จากเชื้อ Mucor rouxii มากที่สุด ยีน cda- TP11 สามารถถอดรหัสเป็นโพลีเปปไทด์ที่ประกอบด้วยกรดอะมิโน 446 ตัว และมีน้ำหนักโมเลกุล โดยประมาณเท่ากับ 49.1 กิโลดัลตัน น้ำหนักโมเลกุลโดยประมาณนี้แตกต่างจากน้ำหนักโมเลกุล ของ CDA-TP11 ที่วิเคราะห์โดยวิธี SDS-PAGE และ activity stain (68 และ 25 กิโลดัลตัน) คาด ว่าค่าน้ำหนักโมเลกุลที่แตกต่างนี้น่าจะเกิดจาก post-translational glycosylation หรือ proteolytic processing ทำให้ได้ขนาดมวลโมเลกุลใหญ่ขึ้น (68 กิโลดัลตัน) หรือเล็กลง (25 กิโลดัลตัน) ตาม ลำดับ Objectives : 1. To search for chitin deacetylase producers 2. To clone and sequence chitin deacetylase gene 3. To characterize the cloned chitin deacetylase gene Rhizopus oryzae F11 was relatively most active in deacetylation of chitin when compared to other 11 fungal and 1 bacterial chitin deacetylase (CDA) producing strains. The CDA from F11 was designed as CDA-TP11. The optimum pH was 6-8 and optimum temperature was 55?C. The chitin deacetylase gene (cda-TP11) from the strain F11 was cloned by RT-PCR using 2 pairs of degenerated primers. Based on partial cDNA sequence, gene specific primers (GSPs) and antisense GSPs were synthesized and used as primers to amplify 5? and 3?ends of cDNA using RACE method. The cda-TP11 from R. oryzae F11 has an open reading frame (ORF) of 1,341 bp and showed high homology to that of M. rouxii. The ORF of cda-TP11 encoded for a polypeptide of 446 amino acid residues with calculated molecular mass of 49.1 kDa. The deduced molecular mass was different from that of two CDA activitry bands estimated by SDS-PAGE which were 68 and 25 kDa. The difference in molecular mass might be due to post translational glycosylation or proteolytic processing to obtain larger (68 kDa) and smaller (25 kDa) activity bands, respectively.

บรรณานุกรม :
ศรีสุรางค์ ตันติมาวานิช . (2552). การคัดเลือกและการขยายยีน chitin deacetylase.
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
ศรีสุรางค์ ตันติมาวานิช . 2552. "การคัดเลือกและการขยายยีน chitin deacetylase".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
ศรีสุรางค์ ตันติมาวานิช . "การคัดเลือกและการขยายยีน chitin deacetylase."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2552. Print.
ศรีสุรางค์ ตันติมาวานิช . การคัดเลือกและการขยายยีน chitin deacetylase. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2552.