ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การแยก การทำให้บริสุทธิ์ และการศึกษาคุณสมบัติของเอนไซม์ ไลเปสจากเชื้อจุลินทรีย์ทนความร้อน

หน่วยงาน ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การแยก การทำให้บริสุทธิ์ และการศึกษาคุณสมบัติของเอนไซม์ ไลเปสจากเชื้อจุลินทรีย์ทนความร้อน
นักวิจัย : อมลยา จตุรภัทร
คำค้น : -
หน่วยงาน : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2538
อ้างอิง : http://www.thaithesis.org/detail.php?id=41262
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

ได้ทำการแยกเชื้อจุลินทรีย์ทนความร้อนที่ผลิต ไลเปสจากน้ำพุร้อนในภาคเหนือของประเทศไทย ได้รวม ทั้งสิ้น 7 สายพันธุ์ สายพันธุ์ที่ผลิตไลเปสสูงสุด (55 หน่วย/ลิตร) คือ TP404 ซึ่งสร้างไลเปสที่ทนความ ร้อนและทำงานได้ดีที่อุณหภูมิ 60 เซลเซียส และทนต่อความ เป็นกรดด่างในช่วง pH7-10. เนื่องจาก TP404 สร้างไลเปสในปริมาณที่ไม่สูงนัก การแยกไลเปสให้บริสุทธิ์จึงจำเป็นต้องใช้เอนไซม์ที่สร้าง โดย E.coli ที่ได้มีการโคลนยีนไลเปสจาก TP404 เข้าไป (E.coli pUCTL4) ขั้นตอนของการทำให้บริสุทธิ์ประกอบด้วย การตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต และ การแยกโดยเทคนิค คอลัมน์โครมาโตกราฟีโดยใช้ DEAE-Sephadex A-25, Sephadex G-100 และ Phenyl Sepharose CL4B ตามลำดับ ไลเปสที่เตรียมได้ประกอบด้วยโปรตีนเพียงชนิดเดียว ทั้งนี้ โดยการตรวจสอบโดยวิธีอีเลคโตรโฟรีซีส (SDS-PAGE) และ ไอโซอีเลกตริกโฟคัสซิ่ง มีน้ำหนักโมเลกุลระหว่าง 40-43 กิโลดาลตัน เมื่อหาโดยวิธี SDS-PAGE และ Sephadex G-100 column ไลเปสที่เตรียมจาก E.coli pUCTL4 มีคุณสมบัติคล้าย คลึงกับไลเปสจาก TP404 ในด้านการทนความร้อนและการทนต่อ ความเป็นกรด-ด่าง เมื่อได้ศึกษาคุณสมบัติของเอนไซม์ พบว่า ถูกกระตุ้นได้โดย Ca(2+) และถูกยับยั้งได้โดย Zn(2+) และ Fe(2+) ในสภาวะที่มีตัวทำละลายอินทรีย์โดยเฉพาะอย่างยิ่ง acetone และ acetonitrile (20-80%) เอนไซม์จะมี activity ลดลง เมื่อได้ทดสอบคุณสมบัติกับสารดีเทอร์เจ้นท์ ในปริมาณระหว่าง (0.1-5%) พบว่า CHAPS, Triton X-100 และ Brij W-1 กระตุ้นการทำงานของเอนไซม์ได้ดีขึ้น ในขณะ ที่ AOT, DOC และ SDS ยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ ในด้าน ความจำเพาะต่อสับสเตรท ไลเปส จาก E.coli pUCTL4 สลายไตรกลีเซอไรด์ที่มีกรดไขมันขนาดกลาง (C(,12)-C(,14)) และกรดไขมันไม่อิ่มตัว (C(,18:1),-C(,18:2)) ได้ดีกว่า กรดไขมันอิ่มตัวขนาดใหญ่ (C(,16)-C(,20)) และสามารถตัด พันธะเอสเตอร์ที่ตำแหน่ง 1- และ 3- ได้ดีกว่าที่ตำแหน่ง 2- เมื่อนำเอนไซม์มาตรึงบน celite พบว่าสามารถเร่งปฏิกิริยา Transesterification ในเฮกเซนได้ จากคุณสมบัติดังกล่าว ข้างต้น ไลเปสที่เตรียมได้สามารถจะนำไปใช้ประโยชน์ทาง ด้านเทคโนโลยีชีวภาพได้เป็นอย่างดี

บรรณานุกรม :
อมลยา จตุรภัทร . (2538). การแยก การทำให้บริสุทธิ์ และการศึกษาคุณสมบัติของเอนไซม์ ไลเปสจากเชื้อจุลินทรีย์ทนความร้อน.
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
อมลยา จตุรภัทร . 2538. "การแยก การทำให้บริสุทธิ์ และการศึกษาคุณสมบัติของเอนไซม์ ไลเปสจากเชื้อจุลินทรีย์ทนความร้อน".
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
อมลยา จตุรภัทร . "การแยก การทำให้บริสุทธิ์ และการศึกษาคุณสมบัติของเอนไซม์ ไลเปสจากเชื้อจุลินทรีย์ทนความร้อน."
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2538. Print.
อมลยา จตุรภัทร . การแยก การทำให้บริสุทธิ์ และการศึกษาคุณสมบัติของเอนไซม์ ไลเปสจากเชื้อจุลินทรีย์ทนความร้อน. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2538.